Бессывороточная, безбелковая питательная среда Гибрис-1-293 (для суспензионной культуры клеток НЕК-293) представляет собой растворенную в деионизованной воде смесь неорганических солей, аминокислот, витаминов, глюкозы и синтетических заменителей сыворотки, простерилизованную фильтрованием через фильтры с размером пор 0,22 мкм.
Среда Гибрис-1-293 характеризуются химически определенным составом компонентов и не содержат продуктов гидролиза белков животной или растительной природы в качестве обогатителей.
Назначение и свойства
Среда «Гибрис-1-293», предназначена для высокоэффективного суспензионного культивирования клеток рекомбинантных клонов и линий НЕК 293 в биотехнологических процессах.
Среда простерилизована фильтрованием через фильтр с диаметром пор 0.22 мкм. Внешний вид: прозрачная жидкость, желтого цвета (модификация без фенолового красного) или желто-оранжевого цвета (модификация с феноловым красным), без опалесценции и осадка. рН от 7.2 до 7.4.
Форма выпуска: Препарат выпускают в пластиковых флаконах (450±5,0 мл). Препарат - прозрачная жидкость, желтого цвета, без опалесценции и осадка, рН от 7,2 до 7,4.
Срок годности: 1 год.
Условия хранения и транспортировки: хранить при температуре 2 - 8°С в защищенном от света месте.
Способ применения
- Вскрыть флакон в асептических условиях.
- Разлить подготовленную среду в культуральные емкости или системы биореакторного культивирования.
- Сеять клетки с плотностью 3 - 6 x 105 клеток/мл.
Примечание: с целью достижения высоких плотностей суспензионных культур клеток НЕК-293, а также продуктивности и качества рекомбинантных белков в биотехнологических процессах предполагается использование специальных подпиток (Feeds). Качественный и количественный состав подпиток определяется клиентом, исходя из особенностей конкретного процесса.
Показатели роста культуры HEK 293 T (НПП «ПанЭко»), в среде «Гибрис-1-293» в условиях модельного биореакторного культивирования.
Лабораторная установка: шейкер для СО2-инкубатора Celltron (Infors, Швейцария) с использованием колб Эрленмейера объемом 100 – 125 мл (рабочий объем среды – 25 – 30 мл) или биореакторных флаконов ООО «ПанЭко» объемом 75 мл (рабочий объем среды – 10 – 12 мл), скорость перемешивания 115 - 130 об./мин; 37 оС, 5 – 6% СО2.
Посевная культура: HEK 239 T (ООО «ПанЭко»), выращенная до плотности 4 – 5 х 106 клеток/мл в перемешиваемой культуре (колба, биореакторный флакон). Начальная плотность культуры в пассаже 2.5 – 6 х 105 клеток/мл.
Оценка результатов теста: оценка эффективности культивирования клеток производилась, начиная с 72 часов после посева. Для подсчета живых клеток суспензия клеток окрашивалась раствором трипанового синего.
Достижение максимума плотности по количеству живых клеток в условиях стационарной культуры без подпиток (batch culture) в среде «Гибрис-1-293» происходило на 4 – 6 сутки от начала культивирования в зависимости от плотности посева. Для линии HEK 293 T (ООО «ПанЭко») при посевной плотности 4 х 105 клеток/мл и с добавкой в среду L-аланил-L-глутамина в конечной концентрации 1600 мг/л максимум плотности наблюдался на 5 день и составлял 4.7 – 6.3 х 106 клеток/мл (n=10) (рис. 1А). Среднее время удвоения 32 – 38 часов. При максимальной плотности клетки практически не образовывали агрегатов.
