Бессывороточная среда "ГибриС-1-CHO"
Продукт является разработкой ООО НПП "ПанЭко". Среда представляет собой изотонический раствор солей, аминокислот, витаминов и глюкозы, приготовленный в очищенной деионизованной воде, стерилизованный фильтрацией через 0,2 мкм PES-фильтры. Среда имеет химически-определенный состав и не содержит продуктов животной или растительной природы.
Базовая рецептура среды не включает источники глутамина и нуклеотиды. Для обеспечения роста некомплементированных DHFR или GS-мутантов, необходимо экзогенно ввести в ее состав предшественники нуклеотидов в форме Гипоксантин/Тимидин (НТ) и/или Глутамин (Аланил-Глутамин).
Среда представляет собой прозрачный раствор желтого цвета, без опалесценции и осадка. Не содержит антибиотиков.
Содержание белка менее 10 мг/л.
рН: от 7,0 до 7,4
Осмолярность: 320±20 мосмоль/кг
Буферная ёмкость: не менее 6,0 мл
Упаковка: 450 мл среды в ПЭТ флаконах
СРОК ГОДНОСТИ: 1 год.
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ: Хранить при температуре от +2 С до +8 С в защищённом от света месте.
НАЗНАЧЕНИЕ: Среда "ГибриС-1-CHO" предназначена для суспензионного культивирования и продукции рекомбинантных белков клетками генноинженерных линий CHO.
СПОСОБ ПРИМЕНЕНИЯ: Флаконы со средой вскрывать в стерильных условиях. Перед использованием необходимо ввести источник глутамина (рекомендован аланил-глутамин) в концентрации 4-6мМ. Для ускорения процессов накопления биомассы и инициации синтеза целевого продукта среду обогащают введением раствора Гипоксантина/Тимидина (НТх50, Кат.Ф050:ПанЭко) до финальной концентрации в среде 1,0-1,5 х.
АДАПТАЦИЯ КЛЕТОК: Линии клеток, культивируемые с использованием классических (сывороточных) сред требуют адаптации при переходе к бессывороточным условиям культивирования. Время периода адаптации определяется опытным путём для конкретной линии клеток.
Адаптация может проводиться 2 способами:
Быстрый способ: осуществляется путём одномоментного перевода адаптируемой культуры в бессывороточную среду. Первый пассаж клеток осуществляется в середине логарифмической фазы роста в концентрации от 1х105 кл/мл.
Ступенчатый способ: осуществляется путём последовательного пассирования клеток на БС, содержащих 2%, а затем 0,5% сыворотки с последующим переводом культуры на БС. Начальная концентрация в суспензии - от 5х104 кл/мл.
В каждом случае адаптация культуры к БС продолжается до тех пор, пока не произойдёт стабилизация показателей клеточного роста (изоморфности культуры клеток, кривой роста, индекса пролиферации, времени удвоения).
