Среда КриоМед-М на основе ДМСО предназначена для суспензионного замораживания и хранения культивируемых клеток в расширенном диапазоне температур от -40оС до -197оС. Высокий процент выживаемости консервируемых клеток обеспечивается синергичным действием 2 типов криопротекторов. Обеспечивает эффективное сохранение рабочих партий клеточных культур в условиях низкотемпературных охлаждающих приборов (-70оС) в течение 1-4 месяцев. Среда не содержит сыворотки и органических компонентов неопределенного состава. Имеет сбалансированный ионный состав.
Инструкция по применению
1. Взять культуру с плотностью монослоя 70-80% (для клеток прикрепляемых культур), или 50-70% плотности суспензии (для клеток суспензионных культур).
2. Снять клетки прикрепляемых культур с субстрата при помощи диссоциирующего раствора Трипсин-ЭДТА 0,05% (0,25%) в течение 5 минут при 37оС (предварительно ополоснуть монослой клеток изотоническим раствором, не содержащим ионов Ca2+ и Mg2+). Клетки суспензионных культур пипетировать и собрать в центрифужной пробирке.
3. Инактивировать трипсин при помощи: среды, содержащей 2-10% сыворотки (для сывороточных культур) или рабочего раствора ингибитора трипсина из плодов сои (0.2 мг/мл) – (для бессывороточных или сывороточных культур).
4. Осадить клетки, центрифугируя при 1000 об/мин 5-7 минут. Удалить супернатант, не затрагивая клеточный осадок.
5. Ресуспендировать клетки в среде «КриоМед-М» из расчета 0,5-2,0 млн/мл.
6. Разлить приготовленную криосуспензию по криопробиркам, герметично укупорить замораживаемые образцы.
7. Поместить замораживаемые образцы в специальный криоконтейнер с крышкой, можно в бокс из пенопласта и поместить его в морозильник (-20оС) для медленного охлаждения на 0,5 – 1,0 час.
8. Перенести бокс с образцами в морозильник глубокой заморозки (-70оС) на 8-12 час или для оперативного хранения в течение 1 – 4 месяцев.
9. Быстро перенести бокс с образцами в жидкий азот (-197оС) для длительного хранения.
Размораживание клеток:
• Полностью разморозить содержимое криопробирок при 37оС.
• Мягко ресуспендировать клетки и однократно отмыть в среде культивирования или изотоническом растворе (1мл криообразца/4мл среды, раствора). Оптимально проинкубировать клетки в отмывочном растворе при комнатной температуре в течение 15 минут. Центрифугировать 1000 об/мин 5-7 минут.
• Ресуспендировать клетки в среде культивирования и посадить в культуральном флаконе 25 см2.
• Для максимального удаления ДМСО рекомендуется произвести полную замену среды через 1 сутки после начала культивирования клеток.
• При необходимости, перед пассажем оценивают количество жизнеспособных клеток в посевном материале при помощи окрашивания трипановым-синим.
Срок годности: 1 год
Условия хранения и транспортировки:
Хранить при температуре 2 - 8 оС в защищенном от света месте.
