Среда КриоМед-М для криоконсервации, 100 мл, евроПЭТ
Представляет собой готовую к применению сбалансированную среду с ионным составом. Содержит два типа криопротекторов, в том числе диметилсульфоксид (ДМСО), без добавления сыворотки и органических компонентов неопределённого состава. Изготовлена с соблюдением асептических условий.
КриоМедМ – усовершенствованная версия КриоМедП, в которой содержится метилцеллюлоза, сохраняющая клеточные мембраны во время заморозки.
Препарат: Прозрачная жидкость красновато-оранжевого цвета без опалесценции и осадка.
Назначение: Среда используется для криоконсервации и хранения клеток in vitro при температуре от –40 °C до –197 °C. Подходит для суспензионного замораживания и хранения рабочих партий клеточных культур в условиях низкотемпературных охлаждающих приборов (–70 °C) в течение 1–4 месяцев. Обеспечивает высокую выживаемость клеток за счёт синергичного действия двух криопротекторов.
Способ применения:
-
Использовать культуру с плотностью монослоя 70–80 % (для прикрепляемых клеток) или 50–70 % плотности суспензии (для суспензионных клеток);
-
Для прикрепляемых клеток снять клетки с поверхности с помощью раствора Трипсин-ЭДТА 0,05 % (или 0,25 %) при 37 °C в течение 5 минут (предварительно ополоснув клетки изотоническим раствором без ионов Ca²⁺ и Mg²⁺). Суспензионные клетки собрать пипетированием в центрифужную пробирку;
-
Инактивировать трипсин:
– для сывороточных культур – средой с 2–10 % сыворотки;
– для бессывороточных культур – раствором ингибитора трипсина из плодов сои (0,2 мг/мл); -
Центрифугировать клетки при 1000 об/мин. в течение 5–7 мин., удалить супернатант, не затрагивая осадок;
-
Ресуспендировать клетки в среде из расчёта 0,5–2,0 млн кл/мл;
-
Разлить криосуспензию по криопробиркам, герметично укупорить;
-
Поместить пробирки в криоконтейнер или пенопластовый бокс и охладить в морозильной камере при –20 °C в течение 0,5–1 часа;
-
Перенести образцы в морозильник –70 °C на 8–12 часов или использовать в течение 1–4 месяцев;
-
Для длительного хранения перенести в жидкий азот (–197 °C).
Размораживание клеток:
- Полностью разморозить содержимое криопробирок при 37 °C;
- Аккуратно ресуспендировать клетки, развести 1 мл криообразца в 4 мл среды или изотонического раствора, инкубировать при комнатной температуре 15 минут;
- Центрифугировать при 1000 об/мин. в течение 5–7 мин.;
- Ресуспендировать клетки в свежей среде и внести в культуральный флакон 25 см²;
- Через сутки заменить среду для удаления остатков ДМСО;
- При необходимости оценить жизнеспособность клеток методом окрашивания трипановым синим.
Условия хранения: Хранить при температуре +2… +8 °С в защищённом от света месте. Транспортировать всеми видами крытого транспорта при тех же условиях.
