НАТ, 50-кратный, лиофилизованный, стерильный, 10 мл
Представляет собой стерильную лиофилизированную смесь гипоксантина, аминоптерина и тимидина (HAT) – селективную добавку к культуральной среде.
Препарат: Мелкокристаллический белый порошок.. Состав на один флакон: гипоксантин – 6,8 мг (±5 %), аминоптерин – 0,088 мг (±5 %), тимидин – 1,94 мг (±5 %). Для приготовления 50-кратного стокового раствора содержимое флакона растворяют в 10 мл стерильной дистиллированной воды. Стоковый раствор содержит: гипоксантин – 5 мМ, аминоптерин – 200 мкМ, тимидин – 800 мкМ.
Назначение: Используется для избирательной гибели клеток, в которых не функционирует гипоксантин-гуанозинфосфорибозилтрансфераза (ГГФТ), в частности, для селекции гибридомных клеток при получении моноклональных антител. Принцип действия: аминоптерин ингибирует de novo синтез нуклеотидов; клетки миеломы, лишенные фермента ГГФТ, не могут использовать гипоксантин и тимидин из среды и погибают. Гибридомы и лимфоциты, имеющие ГГФТ, выживают. Применяется в биотехнологии и иммунологии.
Способ применения: Содержимое флакона растворить в 10 мл стерильной дистиллированной воды – получить 50-кратный стоковый раствор. Для селекции гибридом добавить 10 мл 50-кратного раствора на 490 мл полной питательной среды (конечное разведение 1×, содержащее 100 мкМ гипоксантина, 0,4 мкМ аминоптерина, 16 мкМ тимидина). Культивировать в среде с HAT в течение 10–14 дней. Для проведения стерильных работ вскрытие флакона проводить в асептических условиях.
Условия хранения: Хранить при температуре от –10 до –20 °C в защищенном от света месте. Транспортировать всеми видами крытого транспорта при температуре –10…–20 °C.
