НАЗНАЧЕНИЕ
Среда ЭКО 1 «Универсальная» предназначена для проведения фертилизации. Может быть использована для кратковременного культивирования эмбрионов на ранней стадии развития. Среда пригодна также для проведения процедуры ИКСИ.
Среда ЭКО 1 «Универсальная» используется во вспомогательных репродуктивных технологиях, предназначена к применению в лечебно-профилактических и научно-исследовательских учреждениях.
ОСНОВНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ИЗДЕЛИЯ
Среда ЭКО 1 «Универсальная» приготовлена на основе бикарбонатного буфера. В состав среды входит вода очищенная, соли Эрла, глюкоза, лактат, пируват, аминокислоты, человеческий сывороточный альбумин. Альбумин протестирован на наличие поверхностного антигена гепатита В, на антитела к вирусам гепатита С, ВИЧ-1 ВИЧ-2, на антитела к возбудителю сифилиса.
Среда ЭКО 1 «Универсальная» может быть приготовлена как с добавлением антибиотиков и красителя фенолового красного, так и без этих компонентов (по желанию заказчика). Среда ЭКО 1 «Универсальная» простерилизована фильтрованием через фильтры с размером пор 0,22 мкм
ПРОТОКОЛ ПРИМЕНЕНИЯ
Для проведения фертилизации и кратковременного культивирования эмбрионов рекомендуется следующий протокол:
1. Перед использованием приоткрытый флакон со средой выдерживают в атмосфере 5-6% СО2 при температуре 37 °С в течение 2 ч.
2. Для успешного проведения фертилизации требуется использовать сперматозоиды в оптимальной концентрации: 80 000 -100 000 подвижных сперматозоидов в 1 мл среды.
3. Ооцит-кумулюсные комплексы после отмывки в среде ЭКО 1 «Ооклин»помещают в среду ЭКО 1 «Универсальная» и инкубируют в ней в течение 3-4 ч.
4. По истечении этого времени в капли со средой, в которых содержатся ооцит-кумулюсные комплексы, вносят рассчитанный объем отмытых сперматозоидов до конечной концентрации в среде 80000-100000 подвижных сперматозоидов в 1 мл среды.
5. Сразу после внесения сперматозоидов планшет переносят в СО2-инкубатор.
6. Через 16 -20 ч ооциты осторожно промывают, перенося через несколько капель с уравновешенной средой ЭКО 1 «Универсальная». Затем проверяют формирование пронуклеусов в зиготах, после чего нормально сформировавшиеся зиготы осторожно промывают и переносят в среду для культивирования эмбрионов (ЭКО ПРО «Дробление» или в новую порцию среды ЭКО 1 «Универсальная»).
7. Культивирование в среде ЭКО 1 «Универсальная» можно проводить до стадии двух бластомеров, затем эмбрионы следует поместить в среду для последующего культивирования до стадии 4-8 бластомеров (ЭКО ПРО «Дробление»).
8. Фертилизацию и культивирование можно проводить в микрокаплях среды, покрытых жидким парафиновым маслом, либо в лунках со средой объемом 500 мкл без покрытия среды маслом.
Для использования среды при проведении процедуры ИКСИ рекомендуется следующий протокол:
1. Перед использованием приоткрытый флакон со средой выдержать в атмосфере 5-6% СО2 при температуре 37 °С в течение 2 ч.
2. Ооцит-кумулюсные комплексы после отмывки в среде ЭКО 1 «Ооклин»помещают в среду ЭКО 1 «Универсальная». Инкубация в среде ЭКО 1 «Универсальная» должна проводиться в течение 3-4 ч.
3. Затем проводят освобождение ооцитов от кумулюсных клеток с помощью кратковременного выдерживания в среде ЭКО 1 «Гиаза» и последующей денудации ооцитов в среде ЭКО 1 «Универсальная».
4. После проведения денудации и перед проведением инъекции сперматозоида ооциты должны быть выдержаны в СО2-инкубаторе в среде ЭКО 1 «Универсальная» в течение небольшого промежутка времени.
5. Процедуру инъекции сперматозоида проводят в чашках Петри. В середину чашки вносят каплю среды ЭКО 1 «ПВП». В эту же чашку помещают капли среды ЭКО 1 «Универсальная», в которой будут проводиться инъекции. Количество этих капель соответствует количеству ооцитов.
6. Все капли должны быть покрыты слоем жидкого парафинового масла, предварительно выдержанного в атмосфере 5-6% СО2 при температуре 37 °С в течение 12 ч.
7. Чашку с покрытыми маслом каплями среды рекомендуется оставить на некоторое время в СО2-инкубаторе, чтобы рН среды и температура вернулись к необходимым значениям.
8. Подготовленные сперматозоиды помещают в центральную каплю. В периферические капли вносят ооциты.
9. Проводят фиксацию одного сперматозоида с помощью инъекционной микропипетки. Инъекцию сперматозоида рекомендуется проводить в минимальном объеме среды ЭКО 1 «ПВП».
10. Затем проводят фиксацию ооцита с помощью холдинг-пипетки. Важно зафиксировать ооцит таким образом, чтобы полярное тельце находилось в позиции на 6 или на 12 ч.
11. Инъекционную микропипетку вводят в ооцит в положении на 3 ч. Для подтверждения прокола блестящей оболочки рекомендуется аспирировать часть цитоплазмы.
12. Если пипетка проникла внутрь цитоплазмы, то сперматозоид с частью аспирированной цитоплазмы вводят внутрь ооцита.
13. После введения сперматозоида подают давление в холдинг-пипетке и ооцит отсоединяется.
14. После проведения инъекции ооциты промывают и инкубируют в уравновешенной среде ЭКО ПРО «Дробление» или ЭКО1 «Универсальная».
15. С момента инъекции должно пройти 16-18 ч, после чего проверяют формирование пронуклеусов в ооцитах. Дальнейшее культивирование проводят в тех же средах.
16. Культивирование можно проводить до стадии двух бластомеров в среде ЭКО 1 «Универсальная», затем эмбрионы следует поместить в среду ЭКО ПРО «Дробление» для последующего культивирования до стадии 4-8 бластомеров, либо перенести в полость матки для имплантации в среде ЭКО ПРО «Швартовая».
СРОК ГОДНОСТИ, УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ
Срок годности среды – 3 месяца со дня изготовления при условии соблюдения режима хранения.
Хранить и транспортировать в соответствии с СП 3.3.2.1248-03 при температуре от 2 до 8 °С в защищенном от света месте.
Не замораживать!
Неиспользованный остаток нагретой среды, не подлежит повторному нагреванию и использованию.
Продукт должен быть использован в течение 7 дней с момента первого вскрытия флакона.
Рекомендуется хранить среду с минимальным объёмом воздуха во флаконе.
Вскрытие флакона должно производиться в стерильных условиях.
